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动物细胞培养技术思考题

时间:2017-03-26


《动物细胞培养技术》复习思考题 动物细胞培养的实验器皿清洗要求为何较高?你认为该如何保证器皿中无杂质?如果器皿 中有杂质,会对细胞培养产生什么样的影响? 答:①离体细胞对各种毒物都很敏感,若所用器材清洗效果未达到要求,各种毒物会损坏细 胞影响实验。②器皿使用高压灭菌锅,121.3℃,20~30 分钟,在取拿的时候用经过高压灭 菌后的镊子取拿,避免造成污染。③ 叙述超净工作台的工作原理? 答:超净工作台最主要的是空气循环过滤的过程,在这个过程中风机起到了心脏的作用。鼓 风机驱动空气通过高效过滤器得以净化,净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、 细菌甚至病毒颗粒带走,使工作区构成无菌环境。 正压过滤器为何会除菌? 答:正压式过滤器没有内置灭菌灯,正压式过滤器利用的是两层 0.22um 孔的过滤膜,这层 膜可以将细菌阻挡在膜上,过滤的液体流下去就基本上完成了灭菌过程 各种细胞培养用液的配制需要很精确吗?如果不精确, 会导致什么后果?请举例说明。 你认 为精确配制各种溶液? 答: 配制后平衡盐溶液呈黄色意味着液体的 pH 发生了什么变化? 答:配制后的液体应呈桃红色,PH 值为 7.4 左右。苯酚红的变色域:1.2(橙)~3.0(黄) , 6.5(棕色)~8.0(紫色) ,若为黄色,则液体呈酸性,不利于细胞的生存。 用于分离细胞的消化液为什么宜用无 Ca、Mg 离子的 D-Hanks 液或 PBS 液配制 答:Ca+2、Mg+2 是细胞膜的重要组分,具有使细胞凝聚的作用。因此,用于分离细胞的 消化液宜用无 Ca+2、Mg+2 离子的 D-Hanks 液或 PBS 液。 L-谷氨酰胺在营养液中有何作用? 答: L-谷氨酰胺是细胞的能量来源;是一种必须氨基酸,是使物体合成核酸、蛋白质、嘌 呤、嘧啶的重要前体,也是蛋白质合成分解的调节物;是细胞内氨的清除剂,氨对一些细胞 有毒性。 HEPES 溶液的作用机理? 答:它是一种氢离子缓冲剂。主要作用是防止培养基 pH 迅速变动 平衡盐溶液的组成与基本作用?小牛血清在细胞培养中有哪些作用? 答:①平衡盐溶液主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持 pH 稳定及提供简单的营养.主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。② 作用:a 提供能促使细胞指数生长的激素、基础培养基中没有或含量微小的营养物,以及某 些低分子营养物质; b 提供结合蛋白,识别维生素、脂类、金属离子,并与有毒金属和热源 物质结合, 起解毒作用; c 是细胞贴壁、 铺展生长所需因子的来源;d 起酸碱度缓冲液作用; e 提供蛋白酶抑制剂,细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受损伤。 营养液制备后为什么要小剂量分装? 答:避免营养液被污染后,全部的营养液都被污染。 营养液一次用完过后,下一次的实验就不能用,会引起污染,影响实验,若冷冻营养液,则 营养液的营养成分会有所损失,影响细胞的生长 10 万 U/mL 单位青霉素、链霉素的配制方法? 答:用注射器吸 10 毫升双蒸水溶解 100 万单位的链霉素,弃去 2ml,用剩余的 8ml 链霉素 溶解 80 万单位的青霉素,配制成每毫升青霉素、链霉素各 10 万单位的母液。

细胞培养过程中对无菌的要求很高, 你认为该如何操作才能保证培养过程中无微生物污染? 请详细阐述。 答:①实验进行前,无菌室及无菌操作台(laminarflow)以紫外灯照射 30-60 分钟灭菌,以 70%ethanol 擦拭无菌操作抬面,并开启无菌操作台风扇运转 10 分钟后,才开始实验操作② 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞, 必要物品, 小心取用无菌之实验物品, 避免造成污染。 勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口, 亦不要在打开之容器正上方操作实验③进无菌室前要彻底 洗手④使用培养液前不宜过早开瓶,开瓶后的培养液应保持斜位,避免直立,以防止下落细 菌的污染。⑤操作时尽量不要谈话,咳嗽以防止来自唾沫和呼出的气流所造成的污染。⑥) 吸取培养液、细胞悬液时,应专管专用⑦⑧ 你认为组织块培养成功需哪些条件?你们小组为了实验成功采取了哪些具体的措施?你在 本次实验中做了什么工作? 答:①实验所用的器材必须保证无菌无毒,用胰蛋白酶(浓度适中)消化的时间不宜过长和 过高、营养、温度 组织块培养的基本原理如何? 答:细胞增殖 何时须更换培养基进行传代?可否使用与原先培养条件不同之血清种类来进行后期的培 养? 答:①一般两天换一次,如果细胞贴壁率变化不大,可以适当延长,到细胞贴壁率达到 85 左右, 可以传代②不能。 血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源, 所以血清的种类和品质对于 细胞的生长会产生极大的影响。 来自不同物种的血清, 在一些物质或分子的量或内容物上都 有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。 培养细胞时不用 CO2 或使用 5 % 或 10% CO2 是否都可以?说明原因? 答: 不是。 一般培养基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+作为 pH 的缓冲系统,而培养基中 NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的 CO2 浓度.当培养基中 NaHCO3 含量为每公升 3.7 g 时,细 胞培养时应使用 10 % CO2;当培养基中 NaHCO3 为每公升 1.5g 时,则应使用 5 %CO2 培养细 胞. 你认为心肌细胞培养的基本操作要点是什么?你在其中参与了什么操作?有什么体会? 答:①要点:1) 、首先用细胞分散法收获细胞,随时吸取少量消化液在镜下观察,并根据组 织是否分散成细胞团或单个细胞,采取终止消化措施。用筛网滤掉未消化的组织块。 2) 、低速离心细胞悬液,弃掉上清液,加入含血清的培养液,轻轻吹打制成细胞悬液,计数 并用培养液调整细胞密度。 3) 、用吸管吸取一定量的细胞悬液,加到培养瓶中。 4) 、将培养瓶放入 37℃恒温箱中培养。 5) 、每隔 2 到 3 天更换培养液一次或根据培养液颜色的变化确定换液时间。 培养瓶移入 CO2 恒温箱培养时,瓶盖为何要稍松?又如何避免细胞污染?如果细胞污染有 何挽救措施? 答:①拧紧瓶盖无法进行气体交换,瓶盖稍松才能为细胞生长提供必要的氧气和二氧化碳, 尤其是二氧化碳特别重要,细胞在酸性培养液中生长的更好② 胰蛋白酶的消化原理如何?如何初步判断胰蛋白酶的消化时间? 答:①原理:细胞外含有多种胞外蛋白,如胶原蛋白;使细胞间或细胞与培养瓶内壁粘连起 来.用胰蛋白酶分解这些蛋白质后就可以使它们分开了 ! ②显微镜下观察细胞:倒置显微镜 下观察消化细胞, 若胞质回缩, 细胞之间不再链接成片, 表明此时细胞消化适度。 2~10 分钟 细胞培养到一定时间为何要进行传代?能一直传代下去吗?阐述其机理。

答:①因为进入衰亡期,细胞发生接触抑制,营养逐渐耗尽,有毒废物积累,细胞变大自溶.这时 就要重新接种培养。②不能。正常细胞每分裂一次端粒会逐渐缩短,分裂次数过多会衰老直 至死亡。但肿瘤细胞除外。


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